人小细胞肺癌细胞DMS114培养说明书

一、培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首轮传代建议采用1:2的比例

传代情况：每两天更换培养液

备注：使用无菌离心管收集培养基，用于对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买ag尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理及培养方法

收到细胞后，待培养至良好状态，建议用完全培养液灌满瓶子并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。操作前，请用75%酒精喷洒细胞瓶进行消毒，随后在超净工作台内操作，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并分别拍摄不同倍数的细胞图像（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据。如未提供照片，默认细胞状态良好。

在传代时，请将一瓶细胞用原瓶的完全培养基，另一瓶用自己配置的完全培养基，以便进行对比培养，换液后要将瓶盖轻松拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将瓶中的完全培养液转移至离心管中，保留5ml完全培养基，再放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度已超过80%，请按以下步骤进行传代：

1. 弃去上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后显微镜观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶并加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落，吸出悬液移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶达到80%时，弃去培养液，使用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养基停止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1mlag尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速置入37℃水浴中解冻，至冻存管无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

一些细胞可能在运输过程中容易脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养瓶内的培养液全部收集至离心管，进行1000 RPM离心5分钟，然后使用收集的上清进行过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基终止反应。再次离心后，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

细胞出现问题时，可重发的情况包括：

1. 在运输过程中发生的丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等。
2. 收到产品后48小时内提出的细胞污染问题，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，若干冰冻存发货的细胞复苏24小时后未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片）。
4. 干冰发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时未开封后出现污染。
5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内提出真实实验结果，如通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予以重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，未在3天内告知问题的，视为产品合格。4-7天内如出现问题需提供前三天照片及详细操作步骤，技术人员判定为我方责任时将予以重发。

2）不予重发的情况

细胞出现问题不予重发的情况包括：

1. 因客户操作造成的细胞污染。
2. 客户不当操作导致的细胞状态不良。
3. 非本库推荐的培养体系造成的细胞状态问题。
4. 细胞状态不良且未提供前三天照片。
5. 细胞培养期间的其他处理。
6. 收到细胞2天内未告知问题。
7. 依据具体情况而定。

请严格遵循以上培养注意事项以保证细胞生长的良好状态，更多细节请联系ag尊龙凯时进行咨询。