在生物医疗领域，标本的采集与保存对于ELISA（酶联免疫吸附测定）至关重要。广泛适用的标本包括体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便），可用于检测特定的抗体或抗原成分。一些标本可直接用于检测（例如血清和尿液），而其他标本（如粪便和某些分泌物）则需要经过预处理。大多数ELISA检测使用血清作为标本，因为血浆中的成分与血清相似，但需要抗凝剂的辅助处理，而血清则可以通过自然凝固和血块收缩来获得。

在医学实验中，血清通常作为检测标准。然而，血浆和血清在ELISA中可以等同使用。采集血清标本时，应避免溶血，因为红细胞的溶解会释放出具有过氧化物酶活性的物质，可能导致HRP标记的ELISA测定中出现非特异性显色。新鲜血清样本的检测效果最佳；若出现细菌污染，可能会产生假阳性反应。若在冰箱中保存过久，样本中的成分可能会聚合，导致间接法ELISA结果的背景值增加。通常情况下，5天内的血清样本应储存在4℃，如需超过一周，建议低温冻存。

为了避免样本因反复冻融而导致抗体效价下降，建议将血清样本分装存储。保存时，应确保无菌操作，必要时可以加入适当的防腐剂。

在准备ELISA实验所需试剂时，应根据试剂盒说明书的要求进行。所用的蒸馏水或去离子水，需为新鲜且质量高的。自制的缓冲液需要使用pH计进行准确测量。此外，从冰箱中取出的试剂应在室温下平衡后方可使用，并及时将未使用的部分放回冰箱保存。

在ELISA过程中，加样一般分为三个步骤：加样本、加酶结合物和加底物。加样时需将所添加的物质放在ELISA板孔的底部，避免溅出或产生气泡。一般使用微量加样器，在每个样本加样后更换吸嘴，以防止交叉污染。对于需要稀释的血清样本，可以在试管中按比例稀释后再进行加样，或在板孔中加入稀释液后再添加血清样本，并轻轻混合。

在ELISA中，通常有两次抗原-抗体反应，完成这些反应需要特定的温度和时间，这一过程称为温育。ELISA作为一种固相免疫测定，其抗原和抗体的结合仅在固相表面发生。以夹心法为例，标本中抗原的分布并不均匀，因此需要时间让反应达到平衡。常用的温育温度包括43℃、37℃、室温和4℃。在建立ELISA方法的反应动力学研究中，实验表明，37℃的温度通常能在1-2小时内达到产物峰值。尽管提高温度可加速反应，但建议不超过43℃。

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